甲型H1N1流感快速诊断试剂揭秘

http://www.sina.com.cn 2009年05月07日01:28 21世纪经济报道

　　自5月1日，AM098航班一位墨西哥乘客在香港被确诊为甲型H1N1流感后，公众就在追问如何快速检测。

　　AM098是唯一从甲型H1N1流感重灾区墨西哥城飞往中国的飞机。4月30日，上述乘客在墨西哥城起飞前和抵达上海进行过2次以上的体温检测，均无异常。

　　5月1日后，AM098航班乘客和机组人员都被列入医学观察名单，并相继被各地疾病预防控制中心隔离。

　　“我们的诊断试剂5月1日到的”，上海市疾病预防控制中心微生物检测室主任张曦称，这批试剂由中国疾病预防控制中心国家流感中心网络实验室提供和推荐使用。

　　迄今为止，张曦和她的同事已经对7例样品做了检测，并未发现异常。

　　但微生物检测室已经做好了准备，24小时等候检测送来的病毒样本。“我们也被要求24小时开机，24小时轮班和随叫随到”。

　　5月4日，中墨两国政府协商，双方同意互派包机赴对方国家接回滞留的本国公民。

　　快速研制成功背后

　　甲型H1N1流感病毒的基因组结构和蛋白质组成与普通流感病毒并不相同，已经成为基因重配病毒，包含了欧亚系禽流感病毒基因，再加上原有的北美系古典型猪流感、北美系禽流感，以及季节性H3流感病毒。

　　本报记者获悉，4月27日，中国疾控中心病毒病预防控制所从美国疾控中心获得甲型H1N1流感病毒序列后，即着手进行病毒基因序列的比对、核酸检测技术的设计和测试。4月29日，获得世界卫生组织推荐使用的核酸检测引物信息后，又迅速与中国近年流行的多种季节性流感病毒H1N1对比测试，紧急合成了检测所需的引物序列，装配成第一代人甲型H1N1病毒核酸检测试剂。整个研发过程仅用60多个小时。

　　为何检测试剂这么快就能问世？

　　张曦说，RT-PCR和Real-time RT-PCR并非神秘新奇的手段，现在已经是常规检测方法，不止甲型H1N1型流感，其他很多流感，如禽流感、季节性流感都在使用这两种方法进行检验。科学家们24小时连续工作，找到检测引物并非不可能。

　　“二者都是基于PCR技术原理，”张曦说，因为甲型H1N1流感病毒是新的基因重配病毒，必须增加含有特异性的引物才可以扩增出要检测的病原微生物目标。引物(primer)，是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，存在于自然中生物的DNA复制(RNA引物)和聚合酶链式反应(PCR)中人工合成的引物(通常为DNA引物)。

　　RT-PCR方法加上标本处理，需时6到7个小时能确诊，而Real-time RT-PCR加上标本处理也仅需4个小时。

　　RT-PCR是Reverse transcription PCR的简称，中文译作“逆转录聚合酶链反应”，是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。

　　而Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”，是一种最新发展的定量PCR技术。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量，较以往常用的终点定量的方法更加准确。

　　与此同时，不断有新的快速诊断试剂消息发布，卫生部5月3日称，研制成功快速诊断试剂，当日，农业部也称研制成功，此外5月4日，军事医学科学院军事兽医研究所对外发布了新试剂研制成功的消息。

　　张曦认为，目前使用的中国疾病预防控制中心推荐的试剂具有特异性、敏感性和稳定性。

　　病毒检测流程揭秘

　　本报记者采访过的墨西哥乘客称，只有出现发热或者流感的其他症状才会被检测。“如果没有症状，没有发热，为什么要做检验？提取鼻咽拭子很痛苦，”有关专家称。

　　一次标准的病毒检测过程应该包括：采集呼吸道标本、标本储存、标本处理、检测。

　　虽然检测原理大同小异，但是程序需要十分注意，对实验室要求也很高。

　　采集的样本必须是鼻咽拭子及吸取物或者鼻腔冲洗液及吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。

　　在理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子(例如，聚酯纤维)，用铝或塑料做杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液。

　　只有足够的标本量，才能保证分离到足够的活病毒和用于核酸检测的病毒基因片段。因此，潜伏前期并不一定能检测出来。学术界认为，人感染甲型H1N1流感的潜伏期一般1至7天。

　　标本应置于无菌病毒运输液(VTM)，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃(冰箱)，并马上运送至实验室。所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。

　　临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。

　　剩下的事情就轮到检测机构行动了。