37、目前，高致病性禽流感的研究成果有哪些？

　　从20世纪90年代中期起，我国在禽流感的流行病学、诊断、免疫防治及基础研究等方面做了大量的工作并取得了多项研究结果。禽流感诊断技术方面，已建立：（1）琼脂扩散（AGP）诊断技术。（2）禽流感病毒亚型分型技术。（3）禽流感病毒分子诊断与检测技术。禽流感疫苗研制方面：已研究出了可用于H5亚型高致病性禽流感紧急免疫预防接种的H5亚型禽流感灭活疫苗。H5N1亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗，也已进入环境释放阶段的安全性评价。

　　38、病原的确认工作大概需要多长时间？做什么实验？

　　高致病性禽流感必须通过病毒的分离、鉴定来确诊。病毒的分离及亚型鉴定一般至少需要3~5天。病毒的致病性必须通过人工静脉接种无特定病原鸡（SPF鸡）来最后确定。

　　39、农业部印发高致病性禽流感防治技术规范规定的诊断高致病性禽流感的标准是什么？

　　根据农业部《关于印发〈高致病性禽流感防治技术规范〉等7个重大动物疫病防治技术规范的通知》（农办牧[2002]74号）规定，有下列情况的，可确认为发生高致病性禽流感：（1）有典型的临床症状和病理变化，发病急、死亡率高，且能排除新城疫和中毒性疾病，血清学检测阳性。（2）未经免疫鸡场的家禽出现H5、H7亚型禽流感血清学阳性。（3）在禽群中分离到H5、H7亚型禽流感毒株或其他亚型禽流感毒株。

　　40、根据毒力高低，禽流感分为几类，如何鉴定？

　　流感病毒根致病性大小分为高致病性禽流感病毒（HP禽流感病毒）、低致病性禽流感病毒（LP禽流感病毒）与无致病性禽流感病毒（NP禽流感病毒）。鉴于HP禽流感病毒的重要性，特将其有关鉴定标准和程序介绍如下：

　　世界动物卫生组织对高致病性禽流感病毒的分类标准是：（1）用0.2毫升1：10稀释的无菌感染流感病毒的尿囊液，经静脉注射接种8只4~8周龄的易感鸡，在接种后10天内，能导致6~7只或8只鸡死亡，这些流感病毒应属于高致病性。

　　（2）分离物能使1~5只鸡致死，但病毒不是H5或H7亚型，则应进行下列实验：将病毒接种于细胞培养物上，观察其在胰蛋白酶缺乏时是否引起细胞病变或形成蚀斑。如果病毒不能在细胞上生长，则分离物应被考虑为非高致病性禽流感病毒。

　　（3）对低致病性的所有H5和H7毒株和其他病毒，在缺乏胰蛋白酶的细胞上能够生长时，则应进行与血凝素有关肽链的氨基酸序列分析，如果分析结果同其他高致病性禽流感病毒相似，这种被检验的分离物应被考虑为高致病性禽流感病毒。

　　41、发生禽流感后如何采集分离病原的样品？

　　诊断很大程度上依赖于样品的质量、样品在进行实验室处理前的储存和运输过程的情况。用于细胞培养、鸡胚接种、直接检测病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的样品，应在流感症状出现的开始3天进行采集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳动物及禽类上呼吸道采集的样品适合用于流感病毒的鉴定和诊断。上呼吸道拭子分为三种：鼻棉拭子、喉棉拭子和气管棉拭子。已屠宰或已死亡的哺乳动物应在下呼吸道采集样品，样品分为气管棉拭子、支气管棉拭子、肺组织等三种。禽类样品采集的部位应集中在呼吸道和大部分的消化道，采集的病毒样品种类包括泄殖腔棉拭子和粪便，其中泄殖腔棉拭子可从活体鸡或剖杀的鸡群中采集，从鸡舍或环境中采集粪便样品是常用的采样方法，但其具有不能确定样品的准确来源的缺点，如果怀疑死禽体内含有高致病力的禽流感病毒，还应采集有代表性的内脏器官如脑、脾脏、心脏、肺脏、胰腺、肝脏和肾脏以及呼吸道、消化道等部位的标本。

　　如果想通过对感染细胞进行免疫荧光染色的方法直接检测病毒，那么采集的病料应放在冰浴中，在1~2小时内进行样品处理。用于分离病毒的样品，采完样后应立即将病料放在冰箱中冰冻，并尽可能早地接种于敏感细胞或鸡胚。如果样品不能在48~72小时内处理，应冷冻在-70℃或以下。如果装样品的试管没有被密封，或者装样品的塑料袋封闭不严，则样品不能放在干冰中运输或储存。因为如果一旦干冰接触到病料样品，就能很快地灭活其中可能存在的流感病毒。

　　采集的样品应放在适宜的运输缓冲液中才能确保病毒的分离。目前已有一些适用于不同病毒样品的运输缓冲液，例如Hanks平衡盐溶液、细胞培养液、磷酸盐缓冲液、胰蛋白胨—磷酸肉汤、犊牛肉汤和蔗糖磷酸缓冲液等，在这些运输缓冲液中应添加0.5%~1%的蛋白质，例如牛血清白蛋白、明胶，还应添加抗生素以防止细菌的生长。

　　42、如何采集和运送病理样品？

　　病理样品一般应在感染初期或发病急性期从死禽或活禽采取。死禽采集气管、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、泄殖腔等组织样品。活禽用大小不等的灭菌棉拭子涂擦喉头、气管或泄殖腔，带有分泌物的棉拭子放入每毫升含有1000国际单位青霉素、2000微克链霉素、ph7.2~7.6的肉汤中，无肉汤时可用hanks液或25%~50%的甘油盐水。粪便和泄殖腔棉拭子所用抗生素浓度应提高。

　　样品的运送和保存：采集的样品若在48小时内进行检查，可放入4℃保存；否则应放于低温条件下保存（-70℃贮存最好）。

　　43、高致病性禽流感诊断方法和程序是什么？

　　（1）流行病学禽流感病毒的宿主广泛，鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑和雉鸡等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。其中以鸡和火鸡感染禽流感病毒后的危害最为严重，而在鸭中分离到的病毒比其他禽类多。各种日龄的禽均可感染。

　　禽流感病毒主要通过患禽间（包括与患禽接触的器具）的直接接触和间接接触传染。此外，带毒的飞鸟或水禽常常成为传染源，引起家禽大批地发病和死亡。

　　（2）临床症状禽流感的潜伏期从几小时到3天不等，潜伏期的长短依赖于感染病毒的毒力和剂量、感染途径、被感染禽的种别和禽体的状态。急性感染的禽流感无特定临床症状，在短时间内可见食欲废绝，体温骤升，呼吸道症状，下痢，后期出现神经症状。伴随大量死亡。

　　（3）病理变化禽流感的病理变化因感染毒株毒力的强弱、病程长短和禽种的不同而变化不一。主要表现为头肿，肉髯、冠出血、小腿和趾部皮下出血、水肿、腺胃乳头出血及输卵管炎等。

　　（4）病原学诊断———病毒分离需由国家规定实验室完成。

　　（5）血清学诊断目前用于禽流感检测的方法有禽流感病毒分离技术、琼脂扩散（AGP）试验、血凝抑制（HI）试验、神经氨酸酶抑制（NI）试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、病毒中和试验（SN）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫荧光技术（IF）及核酸探针技术。

　　禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，按说明书操作。

　　总之，对禽流感的诊断，实验室病毒的分离、鉴定，以及致病性试验都耗时较长，花费也较高，只有极少数的实验室能进行此项检查，在收到检查样品后不能在较短时间（48小时）内做出确诊，确诊滞后于现场采取措施的要求。禽流感这类疫病的确诊越快、越早，损失就越小。当疑有禽流感发生时，应及时上报疫情，以求得有关专家及时诊断是十分重要的。

　　44、如何对禽流感做出鉴别诊断？

　　由于禽流感感染引起的流行特点、症状及病理变化与某些禽的传染病相似，必须及时做出鉴别诊断，如鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、传染性鼻炎、支原体病、衣原体病、产蛋下降综合征等；特别是某些疾病的混合感染或继发感染，使病情更为复杂，给诊断带来困难或容易发生误诊。因此，类症鉴别诊断十分重要。

　　首先是与新城疫的鉴别诊断。禽流感与鸡新城疫的流行特点、症状、病变很相似。一般来说，高致病性禽流感的潜伏期和病程比国内目前发生的新城疫为短，新城疫病鸡的呼吸困难，嗉囊和口中的积液，呼吸困难时的咕咕叫声，典型的神经症状等各种表现、常规的典型病变，都较禽流感明显和具有特征性，加之，现场新城疫的紧急免疫效果等，都与禽流感不同。但有的也无明显的不同，两病的准确鉴别诊断，只能依靠实验室的诊断，最简便、实用的方法是病毒分离和血凝抑制试验（HI）。新城疫抗血清抑制不了禽流感病毒的血凝作用，反之亦然。

　　禽流感与其他几种疫病的鉴别，根据流行特点、症状、病理剖检和实验室检查（病原学、血清学）等综合分析，是可以区别开的。同样，继发或并发细菌病或病毒病时，通过病原分离和某些检测方法便可确定。