高致病性禽流感的病原鉴定和疾病诊断方法

　　70.发生禽流感后如何采集分离病原及运送病料样品？

　　诊断很大程度上依赖于样品的质量、样品在进行实验室处理前的储存和运输过程的情况。用于细胞培养、鸡胚接种、直接检测病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的样品，应在流感症状出现的开始3天进行采集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳动物及禽类上呼吸道采集的样品适合用于流感病毒的鉴定和诊断。上呼吸道拭子分为　　鼻棉拭子、喉棉拭

子和气管棉拭子三种。已屠宰或已死亡的哺乳动物应在下呼吸道采集样品，样品分为气管棉拭子、支气管棉拭子、肺组织等三种。禽类样品采集的部位应集中在呼吸道和大部分的消化道，采集的病毒样品种类包括泄殖腔棉拭子和粪便，其中泄殖腔棉拭子可从活体鸡或剖杀的鸡群中采集，从鸡舍或环境中采集粪便样品是常用的采样方法，但其具有不能准确确定样品来源的缺点，如果怀疑死禽体内含有高致病力的禽流感病毒，还应采集有代表性的内脏器官如脑、脾脏、心脏、肺脏、胰腺、肝脏和肾脏以及呼吸道、消化道等部位的样品。

　　如果想通过对感染细胞进行免疫荧光染色的方法直接检测病毒， 那么采集的病料应放在冰浴中，在1~2小时内进行样品处理。用于分离病毒的样品，采完样后应立即将病料放在

　　采集的样品应放在适宜的运输缓冲液中才能确保病毒的分离。目前已有一些适用于不同病毒样品的运输缓冲液，例如Hanks平衡盐溶液、细胞培养液、磷酸盐缓冲液、胰蛋白胨—磷酸肉汤、犊牛肉汤和蔗糖磷酸缓冲液等，在这些运输缓冲液中应添加0.5%~1%的蛋白质，例如牛血清白蛋白、明胶，还应添加抗生素以防止细菌的生长。

　　71.高致病性禽流感诊断方法和程序是什么？

　　(1)流行病学：禽流感病毒的宿主广泛，鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑和雉鸡等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。其中以鸡和火鸡感染禽流感病毒后的危害最为严重，而在鸭中分离到的病毒比其他禽类多。各种日龄的禽均可感染。

　　禽流感病毒主要通过与患禽(包括与患禽接触的器具)的直接接触和间接接触传染。此外，带毒的飞鸟或水禽常常成为传染源，引起家禽大批发病和死亡。

　　(2)临床症状：禽流感的潜伏期从几小时到3天不等，潜伏期的长短依赖于感染病毒的毒力和剂量、感染途径、被感染禽的种别和禽体的状态。急

　　(3)病理变化：禽流感的病理变化因感染毒株毒力的强弱、病程长短和禽种的不同而变化不一。主要表现为头肿，肉髯、冠出血，小腿和趾部皮下出血，腺胃乳头出血及输卵管炎等。

　　(4)病原学诊断：病毒分离需由国家规定的实验室完成。

　　(5)血清学诊断：目前用于禽流感检测的方法有禽流感病毒分离技术、琼脂扩散(AGP)试验、血凝试验、血凝抑制(HI)试验、神经氨酸酶抑制(NI)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(SN)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫荧光技术(IF)及核酸探针技术。其中血凝试验、血凝抑制试验和琼脂扩散试验是OIE推荐使用的方法。

　　禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，按说明书操作。

　　72.病原的确认工作大概需要多长时间？做什么实验？

　　高致病性禽流感必须通过病毒的分离、鉴定来确诊。病毒的分离及亚型鉴定一般至少需要2~3天。病毒的致病性必须通过人工静脉接种无特定病原鸡(SPF鸡)来最后确定。

　　73.如何对禽流感做出鉴别诊断？高致病性禽流感是我国以前所出现过的鸡瘟吗?它们之间应如何区别?

　　由于禽流感感染引起的流行特点、症状及病理变化与某些禽的传染病相似，必须及时做出鉴别诊断，如鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、传染性鼻炎、支原体病、衣原体病、产蛋下降综合征等；特别是某些疾病的混合感染或继发感染，使病情更为复杂，给诊断带来困难或容易发生误诊。因此，类症鉴别诊断十分重要。根据流行特点、症状、病理剖检和实验室检查(病原学、血清学)等综合分析，是可以区别开的。同样，继发或并发细菌病或病毒病时，通过病原分离和某些检测方法便可确定。

　　最近我国由H5N1亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感不是以前我国所出现过的鸡瘟。鸡瘟的学术名称叫新城疫，是1926年在英国一个叫新城的地方发现的一种疾病，故叫新城疫，其发病率和死亡率也非常高，曾给我国的养鸡业造成过巨大危害，但我国已有很好的疫苗控制新城疫，因此该病除了在农村有一些地方还有发生外，在规模化鸡场由于正确接种了疫苗，发病率和死亡率都很低，其危害程度比禽流感轻得多。高致病性禽流感无特定临床症状，表现为突然发病，在短时间内可见食欲废绝、体温骤升、精神高度沉郁，鸡冠与肉垂水肿、发绀，伴随着大批死亡，数天内死亡率可达90%以上。鸡新城疫与禽流感有明显的区别，其病原是完全两种不同的病毒。禽流感病毒是正黏病毒，新城疫病毒是副黏病毒。新城疫病毒感染在早期可见典型临床症状：潜伏期较长，有呼吸道症状，下痢，食欲减退，精神委顿，后期出现神经症状。在目前养殖条件下，新城疫疫苗免疫鸡群很少发生典型的新城疫，感染鸡群一般表现为轻微的呼吸道症状、神经症状和产蛋鸡群的产蛋下降，死亡率较低。

　　74.现在我们国家针对禽流感的检测水平到底怎么样？

　　我们国家自己研究的诊断方法既有传统的血清学抗体检测方法，也有现代的分子生物学抗原检测方法，这些和世界卫生组织的标准是接轨的，并已用于我国禽流感疫病的诊断和病原检测。生产的禽流感诊断试剂是成熟的，已经分发给各省的动物防疫部门实际应用，在加大了对家禽类的监测密度的情况下。同时对水禽野鸟，比如说麻雀、野鸭、鹧鸪等进行监测。

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